污水處理-蛋白質分離純化工藝

親和色譜法（親和色譜法）是分離蛋白質的一種非常有效的方法。通常只需要一個步驟就可以從高純度的復雜蛋白質混合物中分離出某些要純化的蛋白質。此方法基于某些蛋白質與另一種稱為配體的分子特異性結合但不能共價結合的能力。基本原理：蛋白質以復雜混合物的形式存在于組織或細胞中，每種細胞都包含數(shù)千種不同的蛋白質。因此，蛋白質的分離，純化和表征是生物化學的重要組成部分，沒有一種或一套現(xiàn)成的方法可以從復雜的蛋白質混合物中提取任何種類的蛋白質，因此經(jīng)常使用幾種方法。組合。

一、根據(jù)蛋白質分子大小的差異進行分離的方法

1.透析和超濾

透析方法使用半透膜來分離不同分子大小的蛋白質。

超濾方法使用高壓或離心力迫使水和其他小溶質分子通過半透膜，而蛋白質保留在膜上。您可以選擇不同的孔徑來截獲分子量不同的蛋白質。

2.凝膠過濾法

也稱為尺寸排阻色譜法或分子篩色譜法，這是基于分子大小分離蛋白質混合物的有效方法之一。柱中常用的填料是葡萄糖凝膠（Sephadex ged）和瓊脂糖凝膠（瓊脂糖凝膠）。

二、根據(jù)蛋白質的帶電特性進行分離

蛋白質在不同的pH環(huán)境中具有不同的帶電特性和不同的電荷量，可以將其分離。

1.電泳

在相同的pH條件下，由于蛋白質的分子量不同和電場中的電荷不同，因此可以分離出各種蛋白質。值得注意的是等電聚焦電泳，它使用兩性電解質作為載體。在電泳過程中，兩性電解質形成一個pH梯度，從正電極到負電極逐漸增加。當某種帶電荷的蛋白質在其中游動時，它將到達各個點。電點的pH位置停止，此方法可用于分析和制備各種蛋白質。

2.離子交換色譜

離子交換劑包括陽離子交換劑（例如羧甲基纖維素； CM-纖維素）和陰離子交換劑（二乙基氨基乙基纖維素；纖維素）。當分離出的蛋白質溶液流過離子交換色譜時。在色譜柱中，與離子交換劑帶相反電荷的蛋白質被吸附在離子交換劑上，然后通過改變pH或離子強度來洗脫吸附的蛋白質。

3.根據(jù)蛋白質溶解度的不同分離方法

中性鹽對蛋白質的溶解度有重要影響。通常，在低鹽濃度下隨著鹽濃度的增加，蛋白質的溶解度增加，這稱為鹽溶解。當鹽濃度持續(xù)增加時，蛋白質的溶解度將不同程度地降低，并依次發(fā)生這種現(xiàn)象。將大量鹽添加到蛋白質溶液中。高濃度的鹽離子（如硫酸銨的SO4和NH4）具有很強的水合能力，可以帶走蛋白質分子的水合層，形成“水的損失”，使蛋白質膠體凝結并沉淀出來。如果在鹽析過程中溶液的pH值處于蛋白質的等電點，則效果會更好。由于各種蛋白質分子的粒徑和親水性不同，鹽析所需的鹽濃度也不同。因此，調節(jié)混合蛋白質溶液中的中性鹽濃度可以使各種蛋白質分階段沉淀。